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液相色谱质谱联用仪(5600&5600+)常见问题
发布者: 生命科学学院实验服务中心 发布日期:2016-12-12
1.预约和送样问题
        样品准备好后,请登录实验室仪器开放共享管理系统(http://121.192.179.197/index.php?r=user/login),点击“仪器速览”,找到“液相色谱质谱联用仪(5600或5600+)”,进入后,点击“预约”,根据预约要求选择正确的“项目委托”( 1.简单样品:只切一个条带或一个点的考染或者银染样品,样品胶体积不超过100uL;只含单一蛋白的溶液样品; 2.复杂样品:(1)考染后切整条泳道的样品(胶体积小于300uL);(2)IP后的粉末样品或者溶液样品;(3)不需要进一步分组分的组织、细胞蛋白提取样品)。如果不清楚需要选择哪一个“项目委托”,请先到A113室咨询。预约后两小时之内,把样品和填写好的“检测申请单”一起送至黄朝阳楼A113。
 
2.样品浓度和蛋白库问题
        送样前,需要对样品进行定量,胶样品最好用非预染的蛋白标准(Marker)进行定量,液体样品用Bradford、BCA等蛋白定量方法定量。(蛋白量偏差太大,会造成胰酶过量,质谱图里出现很多胰酶的峰,或者胰酶太少,造成蛋白酶解不完全。)
所送样品所属的蛋白库要在uniprot.org能搜索到,或者送样者能提供正确格式的蛋白库文件。
 
3.样品污染物问题
        样品不能含有SDS、TritonX-100、NP-40、PEG、Tween-20、甘油和CHAPS等表面活性剂和去污剂(会竞争性抑制肽段的离子化)。
细胞样品注意收样品前,把培养基中的小牛血清尽可能清洗干净。
角蛋白污染问题:要尽可能避免角蛋白的污染,在制样过程中要注意所用器具的洁净程度。如:在胶样品准备过程中,所有的溶液都要新鲜配制,跑胶用的玻璃板要清洗干净,染色和脱色时使用的器皿要干净,染色液和脱色液要新鲜配制。切胶的时候要保证周围环境的洁净,整个实验过程都要佩戴乳胶手套。
 
4.染色过度问题
        胶样品,考染时控制染色时间,不宜染色太深(看得到条带即可),然后用脱色液脱色至能看清泳道或者目的条带即可。染色太深会造成脱色脱不净,干扰质谱信号。
 
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