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透射电镜常见问题
发布者: 生命科学学院实验服务中心 发布日期:2016-12-09
1.如何进行预约?
        由于实验具有专项性和技术性,透射电镜的使用和样品制备需要经过使用前培训。需要送样的同学须先与电镜室管理人员进行交流,对预备进行检测的样品、预期获得的数据进行讨论,经过初步的制样培训,方可预约送样。由于样品制备及切片工作由电镜室人员完成,送样后需要轮候,故具体上机时间由工作人员完成制样工作后与送样人协商确定,请勿未经任何交流自行预约机时。
 
2.何时进行上机操作培训?
        电镜为大型精密仪器,上机前需经过仪器操作培训,严禁未经培训的人员擅自上机。操作培训一般设置在送样人第一次上机的当天实验前,工作人员将对仪器上机的步骤和基本操作进行详细的说明和指导。送样人能够在管理人员监督下正常使用仪器后方可上机。实验中如有任何状况,请及时呼叫管理人员,禁止擅自进行培训范围之外的操作。灯丝的开启与样品更换由管理人员负责,谢绝自行操作。
 
3.对焦不准怎么办?
        透射电镜具有辅助对焦功能,主要使用像颤按钮进行调整,对到正焦平面之后,必须进行欠焦,如未注意此步骤,将造成图像模糊。
 
4.图像对比度差是什么原因?
        透射电镜由数码CCD进行图像采集,软件将对实验图像进行自动白平衡处理,如画面中出现颜色远深于样品的黑色杂质或者远浅于样品的白色部分,将严重影响图像整体颜色,造成样品部分的颜色偏灰,对比度差。所以在图像采集时,应尽量避免极黑或极白的部位出现在视野中。
 
5.样品膜结构不清晰?
        透射电镜对样品的前固定要求较高,如戊二醛固定步骤出现操作失误,将导致膜结构受到影响。
取材时,样品一旦离开培养环境或者离开活体,应尽快进行固定,培养细胞应保持操作和试剂均低温,动物组织离体后1分钟内要进入固定液。戊二醛渗透能力有限,较大的组织块内部固定效果较差,所以取样时应控制样品大小,尽量保证截面为1mm*1mm,或为扁片状,细胞团应在固定30min后,用针挑离ep管底,细胞固体体积超过10ul者,可用针头划开成两半,以便于固定。
 
6.样品破碎的原因?
        部分细胞贴壁较牢固,如采用刮取的方法收样,将造成胞体破损,此类细胞应采用胰酶消化并收取。注意消化过程不宜过度,过度消化将引起膜结构损失。部分组织对机械损伤较为敏感,钝刀或者牵拉、夹取,都会对组织和微细结构有不良影响,请注意收样时尽量避免机械损伤。也可在解剖时先原位滴数滴固定液进行初步固定,以缓解该问题。
 
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