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扫描电镜常见问题
发布者: 生命科学学院实验服务中心 发布日期:2016-12-09
1.如何进行预约?
        由于实验具有专项性和技术性,扫描电镜的使用和样品制备需要做使用前培训。需要送样的同学须先与电镜室管理人员进行交流,对预备进行检测的样品、预期获得的数据进行讨论,经过初步的制样培训,方可预约送样。样品的制备过程中若需使用真空干燥仪,需与管理人员协商后,在系统内扫描电镜制样项目下进行预约。
 
2.叔丁醇不结晶?
         叔丁醇结晶过夜后请检查结晶状态,如若发现还有少量液态叔丁醇,主要是因为脱水或脱酒精不彻底造成,这将严重影响样品质量。需将样品置于37℃融化后重新更换叔丁醇数次,放入冰箱重新结晶,并于预约实验的当日早上11点前送至电镜室。
 
3.为什么生物样品需要冷冻干燥?
        对于扫描电镜而言,用于观察的样品必须是经过彻底干燥处理的。含水量高的样品在扫描电镜真空的镜筒中将造成诸多不良后果:①样品受电子束轰击后蒸发的水蒸气遭遇高能电子流,产生电离而放电,引起束流大幅度波动,使图像模糊,出现雾状,或者根本不能成像;②大多数样品在高真空中容易发生形态损伤,使研究特征皱缩、变形;③造成物镜、镜头、光阑等的污染;④灯丝碰到水蒸气而氧化变质乃至熔断。虽然近年来出现了环境扫描电镜和冷冻扫描电镜(等可观察含水样品的扫描电镜,但上述观察方法的分辨率较低,因此目前使用较多的还是只能观察不含水样品的SEM。冷冻干燥法是利用低温和真空,使样品中的水分直接由冰升华,或经过某种升华介质由固相升华,已达到干燥样品的目的。冷冻干燥过程使水分从固态直接转化为气态,不经过液态阶段,因而避免了气相和液相之间表面张力对样品的损伤。生物样品的含水量一般为70%-80%,仅少数样品如毛发、牙齿、角质以及含水量极低的昆虫、植物种子、花粉等可以直接喷镀观察,绝大多数的生物样品要求经过干燥处理才能镀金和进行扫描电镜观察。大多数动植物,特别是柔软的细胞核组织,在干燥时由于体积应力和表面张力的作用,容易发生明显的塌陷和变形。干燥是扫描电镜生物样品制备中的关键环节,如果处理不好,会直接影响到观察的清晰度与准确度,甚至直接导致试验失败。
 
4.何时进行上机操作培训?
        电镜为大型精密仪器,上机前需经过仪器操作培训,严禁未经培训的人员擅自上机。操作培训一般设置在送样人第一次上机的当天实验前,工作人员将对仪器上机的步骤和基本操作进行详细的说明和指导。送样人能够在管理人员监督下正常使用仪器后方可上机。实验中如有任何状况,请及时联系管理人员,禁止擅自进行培训范围之外的操作。灯丝的开启与样品更换由管理人员负责,谢绝自行操作。
 
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